重组猫神经生长因子-2的表达纯化与体外活性验证

摘要

旨在开发适用于犬猫神经营养治疗的安全制剂。采用基因工程技术应用pET-32a载体构建猫神经生长因子(FNGF)-2重组表达载体，蛋白诱导表达后通过Western blot方法使用His标签抗体和商品化神经生长因子抗体对表达产物进行特异性验证，并利用大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤(PC12)细胞分化试验评估其生物学活性。结果:试验优化了FNGF基因序列并去除信号肽序列与前导肽序列，将优化后的片段命名为FNGF-2，在成功克隆FNGF-2基因后，构建了p ET-32a-FNGF-2表达载体，成功表达FNGF-2; Western blot方法证实FNGF-2可被特异性识别; PC12细胞分化试验显示，经FNGF-2处理48 h后，可观察到神经突生长，表明FNGF-2能有效诱导细胞分化且具备良好的生物活性。综上所述，本研究成功获得具有生物活性的重组FNGF-2，为其在犬猫神经营养治疗中的临床应用提供了试验依据。

关键词

猫神经生长因子-2 / 原核表达 / 蛋白纯化 / PC12细胞

基金资助

国家重点研发计划项目(2023YFD1800302); 国家自然科学基金面上项目(32273081)