抗副鸡禽杆菌单克隆抗体的制备与鉴定

摘要

旨在制备副鸡禽杆菌(Avibacterium paragallinarum,AP)的单克隆抗体。以灭活的AP全菌作为免疫原，免疫6～8周龄BALB/c小鼠，三免后将小鼠的脾细胞与SP2/0细胞进行融合；以AP全菌作为包被抗原建立间接ELISA方法进行筛选，对阳性杂交瘤细胞进行三轮亚克隆，随后采用间接ELISA、抗体亚类鉴定、Western blot和间接免疫荧光试验对获得的单克隆抗体进行鉴定。结果：成功筛选出3株稳定分泌AP特异性单克隆抗体的杂交瘤细胞株，分别命名为1B4、1F9、3C11。3株杂交瘤细胞分泌的单克隆抗体经鉴定分别为IGg3、IGg3、IGg1亚类。经ELISA检测，1B4和1F9株细胞系上清液效价为1∶512,3C11株为1∶256;1B4和1F9株的腹水样本效价为1∶204 800,3C11株为1∶102 400。Western blot分析表明，3株单克隆抗体均能识别菌体蛋白，1B4识别39 kDa左右的蛋白，1F9与3C11识别36 kDa左右的蛋白。间接免疫荧光试验结果进一步证实，3株单克隆抗体能与受试的3株AP反应产生特异性荧光。综上，本研究成功制备了抗AP的单克隆抗体并初步确定其识别的蛋白，为后续建立AP检测方法与研究致病机理提供了重要的生物材料。

关键词

副鸡禽杆菌 / 单克隆抗体 / 全菌免疫

基金资助

江苏省优势学科第四期项目(2021)