基于TaqMan-MGB多重荧光定量PCR鉴别沙门菌属及肠炎、鼠伤寒、鸡白痢/禽伤寒血清型的方法建立

摘要

旨在建立2种快速鉴定沙门菌属及其主要流行血清型的方法。分别针对沙门菌属invA基因、肠炎沙门菌SEN1392基因、鼠伤寒沙门菌STM4497基因和鸡白痢/禽伤寒沙门菌SGP基因片段设计特异性引物和TaqMan-MGB探针，建立2种双重实时荧光定量PCR（qRT-PCR）方法，并对方法的特异性、灵敏性和重复性进行检测。结果：34株不同血清型沙门菌均可扩增出invA基因，其他8株非沙门菌未出现invA非特异性扩增，SEN1392、STM4497、SGP的引物和探针可用于特异性鉴定肠炎沙门菌、鼠伤寒沙门菌和鸡白痢/禽伤寒沙门菌，对其他39株细菌无扩增。研究建立的qRT-PCR方法的最低检测限分别为1.74×10²、1.83×10²、1.98×10²和2.04×10²拷贝/μL,扩增效率分别为89.57%、91.99%、95.30%和93.43%,组内和组间重复性变异系数均小于1%。综上，研究建立的2种双重qRT-PCR的特异性、灵敏性和重复性良好，为沙门菌快速鉴定及血清分型提供了技术支撑。

关键词

qRT-PCR / TaqMan-MGB / 肠炎沙门菌 / 鼠伤寒沙门菌 / 鸡白痢/禽伤寒沙门菌

基金资助

河北省创新能力提升计划项目(235A6601D); 河北省三期现代农业产业技术体系蛋禽创新团队资助项目(HBCT2024260205); 国家现代农业产业技术体系项目(CARS-40)