渠溪猪肺源间充质干细胞体外培养与生物学特性研究

张婷婷; 闫小妮; 王丰璇; 白娜; 李楠; 关伟军

畜牧与兽医 ›› 2026, Vol. 58 ›› Issue (9) : 86 -95.

张婷婷, 闫小妮, 王丰璇, 白娜, 李楠, 关伟军

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摘要

旨在体外分离培养渠溪猪的肺间充质干细胞(PMSCs),探究其生物学特性、体外增殖与分化能力。从44日龄健康渠溪猪体内无菌分离肺组织，采用组织块贴壁法体外培养PMSCs。本研究分别选取第3、15及25代细胞进行检测分析，通过绘制细胞生长曲线计算群体倍增时间并评估克隆形成能力；采用划痕试验模拟体内创面修复过程，以评价细胞的迁移活性；借助染色体核型分析技术验证细胞的遗传稳定性；通过成骨、成脂及成软骨三系诱导分化试验，联合特异性染色与RT-PCR技术鉴定其多向分化潜能；同时运用免疫荧光染色结合RT-PCR方法检测间充质干细胞典型表面标志物的基因表达水平。结果：分离的PMSCs呈长梭形、平行式生长，生长曲线呈“S”型；P15代群体倍增时间介于P3代与P25代之间，克隆形成率随代次增加呈下降趋势。染色体核型分析显示正常二倍体核型(2n=38);免疫荧光和RT-PCR技术检测发现，PMSCs表面Thy-1胸腺分化抗原(CD90)、内皮糖蛋白(CD105)、5′-核苷酸外切酶(CD73)、整合素β1(CD29)标志物呈阳性反应，造血干细胞抗原34(CD34)标志物呈阴性反应，符合间充质干细胞的鉴定标准。诱导分化试验结果验证了PMSCs能够成功向骨、脂肪和软骨细胞分化。综上，本研究成功从渠溪猪肺组织中分离并培养出具有典型间充质干细胞特性的PMSCs,证实其具备多向分化潜能及良好的遗传稳定性，为种质资源保存提供潜在可利用资源。