H7N9禽流感病毒血凝素蛋白兔多克隆抗体的制备及鉴定

林雪玲; 刘彬健; 刘静; 蔡珊; 胡璎芹; 杨昱; 闫玉淋; 梁昭平; 黄淑坚; 温峰

畜牧与兽医 ›› 2026, Vol. 58 ›› Issue (9) : 46 -52.

林雪玲, 刘彬健, 刘静, 蔡珊, 胡璎芹, 杨昱, 闫玉淋, 梁昭平, 黄淑坚, 温峰

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摘要

旨在构建H7N9亚型禽流感病毒(AIV)血凝素(HA)蛋白的原核表达系统，制备兔源抗HA蛋白多克隆抗体，并系统评价其免疫学性能。设计特异性引物并通过逆转录PCR(RT-PCR)扩增H7N9亚型AIV的HA基因，定向克隆至pET-32a载体并转化Rosetta (DE3)感受态细胞，设置IPTG梯度诱导条件，经镍柱亲和层析纯化、透析复性与PEG20000浓缩处理后作为免疫原免疫新西兰大白兔，并进一步采用Western blot、间接ELISA及间接免疫荧光(IFA)进行抗体特性鉴定。结果：成功构建了重组质粒pET-32a-HA;确定最佳诱导条件为27℃、1.2 mmol/L IPTG诱导16 h,此条件下可获得可溶性目的蛋白并成功诱导产生特异性多克隆抗体；测得抗体效价达1∶1 638 400,且该抗体不仅能被Western blot证实可识别原核表达的HA蛋白，还能被IFA证实能特异性结合H7N9 AIV。综上，本研究建立的HA原核表达及多抗制备体系，为H7N9血清学诊断与疫苗开发提供了高效工具。