旨在调查北京地区规模化牛场乳房炎相关病原菌的分布和耐药性。采集养殖场奶样100份,使用细菌测试片进行菌株初筛,经过质谱鉴定和16S r DNA测序确定病原菌种属,并对病原菌进行药敏检测。结果:奶样中共分离到74株细菌,主要流行病原菌为大肠杆菌、产色葡萄球菌、松鼠葡萄球菌、乳房链球菌、副乳房链球菌和停乳链球菌,分离率分别为13.00%、11.00%、6.00%、6.00%、5.00%和3.00%;大肠杆菌对阿莫西林-克拉维酸、头孢噻呋和卡那霉素-头孢氨苄耐药率分别为30.77%、30.77%和7.69%;乳房链球菌对卡那霉素-头孢氨苄和强力霉素的耐药率分别为16.67%和33.33%;副乳房链球菌对卡那霉素-头孢氨苄和马波沙星的耐药率均为20.00%,其余菌株对检测药物均敏感。本研究结果可为北京地区奶牛乳房炎的防控提供基础数据支持。