沉默Ras同源物家族成员C对唾液腺腺样囊性癌增殖、侵袭和迁移的影响

摘要

目的 探讨沉默Ras同源物家族成员C (RhoC)对唾液腺腺样囊性癌（SACC）增殖、凋亡、侵袭、迁移和上皮-间充质转化（EMT）的影响及其分子机制。方法 选择2019年1月1日—2024年3月1日于青岛市市立医院手术切除的SACC病灶和正常唾液腺组织各27例，通过蛋白免疫印迹（Western blot）和免疫组织化学法检测RhoC的表达水平。针对RhoC基因序列设计3条小干扰RNA (siRNA)，转染至SACC-LM和SACC-83细胞系中并评估转染效率。通过Western blot比较RhoC、Rho相关卷曲螺旋蛋白激酶1 (ROCK1)、p38丝裂原活化蛋白激酶（p38MAPK）、磷酸化p38MAPK (p-p38MAPK)、扭曲家族bHLH转录因子1 (TWIST1)、E-钙黏蛋白（Ecadherin）、 N-钙黏蛋白（N-cadherin）、波形蛋白（Vimentin）的蛋白表达水平。CCK-8实验、流式细胞术、Transwell侵袭实验、伤口愈合实验分别检测各组细胞增殖、凋亡、侵袭和迁移能力的差异。生物信息学方法预测RhoC可能的上游微小RNA (miRNA)及其在SACC中的表达情况，双荧光素酶报告基因实验验证二者的结合位点。结果RhoC在SACC中的表达显著上升（P<0.05）。沉默RhoC后，实验组ROCK1、p-p38MAPK、TWIST1、N-cadherin、Vimentin的表达显著下降，E-cadherin的表达显著上升（P<0.05）;p38MAPK的表达无明显差异（P>0.05）；细胞增殖、侵袭和迁移能力显著下降，凋亡率显著上升（P<0.05）。miR-138-5p在SACC中低表达，miR-138-5p micmic可以显著下调转染RhoC野生型质粒后293T细胞的荧光素酶活性（P<0.05）。结论RhoC在SACC中高表达，沉默RhoC可能靶向下游ROCK1/p38MAPK/TWIST1信号通路从而抑制SACC的增殖、侵袭、迁移和EMT，同时促进其凋亡。miR-138-5p在SACC中低表达，是RhoC潜在的上游基因，二者可能存在结合位点。

关键词

唾液腺腺样囊性癌 / Ras同源物家族成员C / Rho相关卷曲螺旋蛋白激酶1 / 上皮-间充质转化 / miR-138-5p