微阵列技术探究限域面积对成牙本质细胞极化和分化的影响

摘要

目的 利用光刻技术制备图案化的细胞差异黏附表面，探讨黏附面积对成牙本质细胞极化与成牙向分化的影响。方法 利用光刻技术和聚乙二醇二丙烯酸酯（PEGDA）水凝胶制备了具有差异黏附特性的图案化微阵列，通过对细胞产生限域作用，促使人牙髓干细胞（hDPSCs）呈现天然成牙本质细胞样形态。筛选孤立培养的单个hDPSCs，探究不同面积（1 800、2 700、3 600μm²）对成牙本质细胞极化和分化的影响。通过免疫荧光染色观察细胞形态，明确高尔基体和细胞核在hDPSCs中的定位及取向，分析不同面积对细胞极化的作用。通过碱性磷酸酶染色检测hDPSCs成牙向分化率和平均光密度值，探究不同面积对细胞分化的作用。结果 成功分离了hDPSCs并对其鉴定，制备了仿成牙本质细胞形态的图案化微阵列，通过鬼笔环肽染色证实了细胞形状与微图案形状高度相符。免疫荧光染色结果显示限域面积为3 600μm²时，孤立hDPSCs中各项极化和分化水平均明显高于1 800μm²和2 700μm²限域面积的孤立hDPSCs （P<0.05）。结论 本实验通过微阵列技术证实了限域面积参与调控成牙本质细胞极化和分化进程，随着限域面积增大，孤立hDPSCs极化和分化水平升高。

关键词

细胞极化 / 图案化 / 成牙本质细胞 / 细胞分化