基于环境DNA技术检测木材中松材线虫的应用研究

摘要

[目的]旨在基于环境DNA(Environment DNA,eDNA)技术，筛选适用于富集松材线虫eDNA的高效滤膜，建立一种能够从大量木材中快速检测松材线虫的方法。[方法]以松材线虫组织研磨液为材料，比较混合纤维素膜(MCE)、聚醚砜膜(PES)和醋酸纤维素膜(CA)对松材线虫核酸的富集效率，通过实时荧光PCR检测富集后的eDNA，评估不同滤膜的富集效率。进一步采用筛选出的最佳滤膜，对5个不同来源的木材样本(每份50 g)进行eDNA富集，并利用松材线虫特异性引物和探针进行实时荧光PCR检测，以验证该方法的实际应用效果。[结果]MCE、PES和CA这3种滤膜均能富集到松材线虫eDNA，其中MCE和PES的富集效果显著优于CA，而二者之间无显著差异；在低线虫浓度条件下，MCE滤膜表现出最高的回收率。基于此，选用MCE膜对实际木材样本进行eDNA富集与检测。结果显示，所有木材样本的eDNA检测结果与其对应木屑样本的分子检测结果完全一致，证实了该方法的可靠性。[结论]建立的基于eDNA技术与MCE滤膜富集的方法，可有效从大量罹病松木中检测松材线虫，适用于木材样本中松材线虫的高通量、快速筛查，为松材线虫的早期监测与防控提供了可行技术手段。

关键词

环境DNA / 富集滤膜 / 松材线虫 / 检测效率