巴戟散水提物协同调控凋亡通路促进梅花鹿耳缘成纤维细胞增殖

张靖; 陈丽红; 杨月春; 王士勇

沈阳农业大学学报 ›› 2026, Vol. 57 ›› Issue (3) : 98 -106.

张靖, 陈丽红, 杨月春, 王士勇

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摘要

[目的]研究巴戟散水提物对梅花鹿耳缘成纤维细胞增殖作用及其调控凋亡效应。[方法]选取成年梅花鹿24头，随机分为空白对照组和给药组。给药组连续30 d每日饲喂含巴戟散水提物的日粮(500 mg·kg^-1)。给药结束后采集耳缘皮肤组织并经组织块贴壁法分离原代成纤维细胞。通过细胞形态学观察、MTT法检测细胞活力、绘制生长曲线以及qPCR技术，分析巴戟散水提物对细胞增殖速度及凋亡相关基因表达的影响。[结果]两组细胞均呈现典型成纤维细胞形态学特征，细胞生长曲线呈“S”形。给药组增殖速率显著高于空白对照组（P<0.05），其细胞密度峰值出现于接种后第4天，早于空白对照组（第6天）。MTT检测显示，在P2、P3代细胞培养72 h后，给药组细胞增殖速度分别为空白对照组的1.97倍和1.68倍（P<0.05）。qPCR检测显示，与对照组相比，给药组显著上调抗凋亡基因Bcl-2的mRNA相对表达量（P<0.01），下调促凋亡基因Bax的mRNA相对表达量（P<0.05），使Bcl-2/Bax比值显著升高（P<0.05）。同时，给药组极显著抑制内源性（线粒体）凋亡通路关键基因Caspase-9和Apaf1（P<0.01），以及外源性（死亡受体）凋亡通路关键基因Fas、TNFRSF1A、DR5和凋亡执行分子Caspase-3、Caspase-8（P<0.05）的mRNA相对表达量。[结论]巴戟散水提物能够促进梅花鹿耳缘皮肤成纤维细胞增殖，并显著抑制细胞凋亡。其作用机制涉及协同调控内源性和外源性凋亡通路，表现为上调抗凋亡基因表达，下调促凋亡基因表达，并抑制Caspase级联反应，为濒危鹿科动物种质资源库构建提供技术支持，也为中药复方在细胞生物学领域的作用机制研究提供新视角。