miR-23a/27a/24基因簇g.65307469G>A突变对大白猪产仔数和启动子活性的影响

摘要

[目的]本文旨在研究大白猪miR-23a/27a/24基因簇启动子突变位点多态性与产仔数性状的关系及潜在机制，为母猪繁殖性状的分子育种提供新的潜在遗传标记。[方法]利用混池测序技术筛选猪miR-23a/27a/24基因簇启动子突变位点，直接测序法对大白猪群体(n=345)miR-23a/27a/24基因簇突变位点进行基因分型，计算遗传多样性；用线性模型对突变位点多态性与产仔数性状进行关联性分析；构建不同等位基因类型启动子载体，转染猪卵巢颗粒细胞，通过检测荧光素酶活性分析突变对启动子活性的影响；用生物信息学方法预测不同等位基因类型启动子潜在结合的差异转录因子，用荧光素酶活性分析差异转录因子对不同等位基因类型启动子活性的影响。[结果]在猪miR-23a/27a/24基因簇启动子-648 nt(Chr.2,65 307 469 nt)处发现1个新的G/A突变，命名为g.65307469G>A。在大白猪群体中发现3种基因型(GG、GA和AA),其中GG为优势基因型(89.57%),G等位基因为优势等位基因(94.64%)。关联性分析发现，GA基因型母猪的总产仔数(TNB)比GG基因型母猪每胎高0.56头(P<0.05)。荧光素酶活性分析结果显示G等位基因类型启动子活性显著高于A等位基因类型(P<0.05)。在不同等位基因类型启动子间发现1个潜在结合的差异转录因子死亡相关蛋白1(THAP1),成功构建猪THAP1基因过表达载体，共转试验结果显示转录因子THAP1对不同等位基因类型启动子活性均无显著影响(P>0.05)。[结论]miR-23a、miR-27a和miR-24是大白猪产仔数性状的候选基因，g.65307469G>A突变抑制miR-23a/27a/24基因簇的启动子活性，但与转录因子THAP1无关。

关键词

大白猪 / miR-23a/27a/24基因簇 / 变异位点 / 产仔数性状 / 启动子活性