抑制猪支持细胞外泌体对精原干细胞自我更新及分化的影响

摘要

[目的]本文利用体外模型检测猪支持细胞分泌外泌体的能力及其对猪精原干细胞(porcine spermatogonial stem cells, pSSC)自我更新及分化状态的影响。[方法]通过两步酶消化法分离猪支持细胞和pSSC并建立猪支持细胞-pSSC体外共培养模型，抑制猪支持细胞外泌体的分泌，检测pSSC自我更新及分化指标，研究支持细胞外泌体对pSSC命运的影响。[结果]分离得到的支持细胞的Wilm肿瘤蛋白1(WT1)阳性率为(87.1±0.02)%,整合素β-1蛋白(ITGB1)阳性率为(94.2±0.01)%,分离得到pSSC的早幼粒细胞白血病锌指蛋白(PLZF)阳性率为(80.6±0.02)%;通过Western blot分析、免疫荧光检测证实支持细胞外泌体的存在；证实20μmol·L~(-1) GW4869可以抑制外泌体分泌且不损害支持细胞；GW4869处理后的支持细胞与pSSC共培养发现试验组较对照组pSSC状态差异较为明显，且RT-PCR结果显示猪精原干细胞PLZF基因表达水平显著升高；肥大/干细胞生长因子受体基因(KIT)、胸腺细胞抗原1基因(THY1)、死盒解旋酶4基因(DDX4)表达水平显著降低；Western blot结果显示猪精原干细胞蛋白基因产物9.5(PGP9.5)蛋白表达水平升高，DDX4蛋白表达水平降低。[结论]体外培养时支持细胞分泌的外泌体对pSSC自我更新和分化均具有调控作用，暗示外泌体是支持细胞调控精原干细胞命运的一种重要方式，这为种公猪生殖力的改善提供了新思路。

关键词

猪支持细胞 / 精原干细胞 / 外泌体