日本脑炎病毒NS1蛋白致脑血管内皮细胞损伤研究

摘要

[目的]本试验旨在探究日本脑炎病毒(Japanese encephalitis virus, JEV)非结构蛋白NS1的生物学功能。[方法]将JEV NS1基因克隆到pFastbac1载体并将其转化至感受态DH10Bac得到重组杆粒，将重组杆粒转染sf9细胞产生重组杆状病毒，通过病毒感染High5细胞成功表达了JEV NS1。在人脑微血管内皮细胞(HBMEC)培养液添加外源NS1蛋白，通过光学显微镜观察细胞形态，利用共聚焦显微镜观察JEV NS1蛋白对HBMEC表面唾液酸修饰的影响，IFA检测细胞中组织蛋白酶L的表达；小鼠经尾静脉注射JEV NS1及其N207糖基化位点突变体蛋白NS1 N207Q,分别于24、48和72 h通过伊文思蓝(EB)染色检测2个蛋白对小鼠的血脑屏障(BBB)通透性的影响。[结果]JEV NS1蛋白通过下调人脑内皮细胞表面的唾液酸修饰和上调组织蛋白酶L表达损伤内皮糖萼；动物试验表明NS1蛋白能够破坏小鼠的血脑屏障；NS1 N207Q蛋白处理对细胞表面唾液酸修饰的影响不显著，体内处理对小鼠的血脑屏障无明显损伤。[结论]JEV NS1蛋白具有损伤人脑微血管内皮细胞的生物学功能，突变N207位点可导致其损伤功能减弱，可为JEV亚单位疫苗候选抗原的优化提供新思路。

关键词

日本脑炎病毒 / NS1蛋白 / 唾液酸修饰 / 组织蛋白酶L / 脑血管内皮损伤 / N207Q突变