猪源CXCL17的原核表达及其对猪巨噬细胞的趋化作用

摘要

[目的]本研究旨在探究CXC趋化因子配体17（CXC motif chemokine ligand 17,CXCL17）对巨噬细胞的趋化作用并解析其分子机制。[方法]构建表达猪CXCL17蛋白的重组菌，该菌经IPTG诱导后高效表达CXCL17蛋白，并主要以包涵体形式存在；包涵体经过变性、纯化和复性获得重组蛋白，利用SDS-PAGE和Western blot对纯化的CXCL17蛋白进行验证。通过CCK-8法筛选CXCL17蛋白对猪巨噬细胞的最佳作用浓度范围，并以此设置浓度梯度处理猪巨噬细胞，用Transwell试验检测CXCL17对巨噬细胞的趋化活性。通过免疫荧光和Western blot检测细胞微丝骨架的变化及相关通路的激活情况，以揭示CXCL17趋化巨噬细胞迁移的作用机制。[结果]重组菌在IPTG终浓度为1.0 mmol·L^-1及37℃诱导条件下表达7 h,获得高表达量的重组猪CXCL17蛋白。该蛋白纯化后的纯度可高达95%。重组猪CXCL17蛋白可以剂量依赖诱导猪巨噬细胞迁移，其机制为通过激活微丝骨架下游的LIMK/Cofilin信号通路引起细胞微丝骨架重排，促进细胞微丝骨架解聚、聚合，从而有利于巨噬细胞迁移。[结论]本研究重组表达了猪CXCL17蛋白，并发现CXCL17蛋白调控细胞微丝骨架诱导猪巨噬细胞迁移的分子机制，为CXCL17作为黏膜免疫增强剂提供了试验依据。

关键词

CXC趋化因子配体17 / 原核表达 / 巨噬细胞 / 迁移 / 黏膜免疫