猪CD205分子CysR-FN Ⅱ蛋白特异性纳米抗体的筛选与鉴定研究

孙鑫; 杨利; 郭东辉; 马旭东; 杜露平; 侯立婷; 陈瑾; 冯秀丽; 郑其升; 程海卫

南京农业大学学报 ›› 2024, Vol. 47 ›› Issue (05) : 941 -947.

孙鑫, 杨利, 郭东辉, 马旭东, 杜露平, 侯立婷, 陈瑾, 冯秀丽, 郑其升, 程海卫

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摘要

[目的]猪CD205分子作为猪树突状细胞(DC)特异性的抗原提呈受体，在抗原提呈过程中起关键作用。本研究通过噬菌体展示技术针对猪CD205分子CysR-FNⅡ蛋白进行筛选以获得其特异性的纳米抗体，为猪CD205靶向抗原提呈研究奠定基础。[方法]利用前期制备的猪CD205分子CysR-FNⅡ蛋白进行羊驼免疫，经6次皮下免疫后采集羊驼外周血淋巴细胞，提取总RNA后反转录获得cDNA,经PCR扩增编码纳米抗体的基因片段，构建猪CD205分子CysR-FNⅡ蛋白噬菌体展示纳米抗体基因文库，再运用噬菌体展示技术针对猪CD205分子CysR-FNⅡ蛋白进行亲和筛选，随机挑选单克隆菌落并使用Phage-ELISA方法鉴定出针对猪CD205分子CysR-FNⅡ蛋白的特异性纳米抗体。[结果]4轮亲和筛选后，通过Phage-ELISA方法鉴定和序列比对分析，共成功获得12个猪CD205分子CysR-FNⅡ蛋白特异性纳米抗体，其相对分子质量约为17×10～3。[结论]本研究成功筛选并获得猪CD205分子CysR-FNⅡ蛋白特异性的纳米抗体。