基于细胞培养基中血清水平优化探索赭曲霉毒素A对HK-2细胞的毒性作用

摘要

[目的]本文旨在探讨细胞培养基中添加不同水平血清对赭曲霉毒素A（ochratoxin A,OTA）毒性的影响，以期更深入了解OTA的毒性，同时为其他OTA体外毒性研究提供重要参考。[方法]测定OTA对人肾皮质近曲小管上皮细胞（human proximal tubule-derived epithelial cells, HK-2）细胞活力的影响，同时利用超高效液相色谱-串联质谱技术检测细胞上清液中OTA浓度以间接反应细胞对OTA的摄入量，分析培养基中不同水平血清对OTA毒性的影响。[结果]细胞培养基中添加5%的血清在48 h内不会影响细胞活力，可以作为细胞正常培养条件；添加2%的血清在36 h不会影响细胞活力，可以作为配制OTA工作液的细胞处理条件。基于优化的细胞培养及处理条件，OTA对HK-2细胞活力的影响结果表明，OTA抑制细胞活力呈现时间和剂量依赖性，OTA处理HK-2细胞12、24、36 h的IC₅₀分别为39.29、6.28和2.72μmol·L^-1。同时OTA可以时间依赖性极显著提高细胞释放乳酸脱氢酶水平，并损伤细胞膜的完整性（P<0.01）。[结论]细胞培养基中添加不同水平的血清会影响OTA的毒性，且血清水平越高，对OTA毒性影响越大。当使用2%血清的培养基配制OTA工作液时，可在不影响细胞活力的前提下最大限度降低血清水平对OTA毒性的影响。

关键词

赭曲霉毒素A / 血清水平 / HK-2细胞 / 超高效液相色谱-串联质谱技术