鹅星状病毒2型单克隆抗体制备及其抗原表位鉴定

王雯; 佟贺; 杨兴淼; 曹瑞兵

南京农业大学学报 ›› 2025, Vol. 48 ›› Issue (02) : 401 -409.

王雯, 佟贺, 杨兴淼, 曹瑞兵

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摘要

[目的]本研究旨在制备抗鹅星状病毒（goose astrovirus, GAstV）单克隆抗体并鉴定其识别的抗原表位，为快速检测GAstV感染和研究P2蛋白的结构与功能奠定基础。[方法]通过原核表达系统表达并纯化GAstV-2 P2蛋白，用其免疫6周龄BALB/c雌鼠，利用杂交瘤技术，经过细胞筛选和亚克隆，获得3株能稳定分泌抗P2蛋白的单克隆抗体，利用Western blot（WB）和间接免疫荧光（IFA）鉴定单抗特异性，用获得的单抗对GAstV感染阴、阳性肾脏切片进行免疫组化检测，用间接ELISA测定单抗效价和亚型，同时构建P2蛋白的不同截短体来鉴定单抗识别抗原表位。[结果]本研究共获得3株能稳定分泌抗P2蛋白抗体的杂交瘤细胞，命名为1B10、3C6、5B1。单抗效价分别为1∶2 048 000、1∶512 000、1∶256 000,亚型鉴定结果显示，3株单抗的重链均为IgG2b,轻链均为Kappa型。WB和IFA结果显示，3株单抗均可以特异性结合鹅星状病毒。免疫组化结果显示，5B1和3C6可以应用于免疫组化的检测。抗原表位鉴定结果显示，1B10识别₁₀₉TSTTSTGGLITELRN₁₂₃,3C6识别₂₀₆LTDPEEDDDPLS₂₁₇,5B1识别₉₆LNPELETAVLRV₁₀₇。[结论]本研究成功制备能识别不同抗原表位的3株单克隆抗体，为快速检测GAstV感染和研究P2蛋白的结构与功能奠定物质基础。