牛病毒性腹泻病毒1型E2蛋白抗体侧流免疫层析检测方法的建立

摘要

[目的]本研究旨在使用金-银纳米颗粒标记纯化的牛病毒性腹泻病毒1型（BVDV-1）重组E2蛋白，建立基于金-银纳米颗粒的E2蛋白抗体侧流免疫层析检测方法。[方法]对金-银纳米颗粒标记条件进行优化，选取2 mg·mL^-1的金黄色葡萄球菌A蛋白（staphylococal protein A,SPA）和BVDV-1单克隆抗体1E2B3包被于硝酸纤维素（NC）膜上，分别作为检测线（test line, T线）和质控线（control line, C线）,对反应条件进行优化后建立侧流免疫层析检测方法。[结果]金-银纳米颗粒最佳标记条件：以pH7.4的硼酸-硼砂缓冲液作为金-银纳米颗粒的溶剂；最佳标记蛋白浓度为10μg·mL^-1。优化后的侧流免疫层析检测方法的反应条件：2 mg·mL^-1的SPA作为T线，0.6 mg·mL^-1的1E2B3作为C线，待检血清稀释度为1∶50。特异性试验结果表明建立的金-银纳米颗粒免疫层析试纸条不与猪瘟病毒（CSFV）、牛病毒性腹泻病毒2型（BVDV-2）、牛副流感病毒3型（BPIV3）、传染性牛鼻气管炎病毒（IBRV）、口蹄疫病毒（FMDV）、牛支原体和布鲁氏菌阳性血清发生交叉反应。敏感性试验结果显示，将BVDV阳性血清（中和抗体效价为1∶2 048）稀释512倍时金-银纳米颗粒免疫层析试纸条仍可检出。使用金-银纳米颗粒免疫层析试纸条检测125份牛血清，并与中和试验结果比较，两者阴性血清符合率为100%,阳性血清符合率为96.04%,总体符合率为96.80%。[结论]本试验基于金-银纳米颗粒建立的免疫层析抗体检测方法具有特异性好、灵敏度高、操作简便快捷的特点，为快速检测BVDV-1抗体提供了有力的技术支撑。

关键词

牛病毒性腹泻病毒 / E2蛋白 / 抗体 / 金-银纳米颗粒 / 侧流免疫层析方法