miR-130a对鸡卵泡颗粒细胞的影响及机制研究

摘要

[目的]本研究旨在分析促卵泡激素(FSH)对鸡颗粒细胞(GC)中miR-130a表达的影响，并探究miR-130a的靶基因及其在颗粒细胞增殖凋亡过程中的效果。[方法]体外分离培养鸡颗粒细胞，并使用不同浓度FSH处理24 h,检测miR-130a和PIK3CB基因的表达；通过双荧光素酶试验检测miR-130a的靶基因；转染miR-130a模拟物(mimics)和抑制剂后用试剂盒检测细胞活力以及细胞培养基中雌二醇(E2)和孕酮(P4)含量，荧光定量PCR和Western blot检测凋亡基因BCL2和BAX的表达。[结果]miR-130a和PIK3CB基因在FSH处理下的表达趋势相反。与对照组相比，共转染miR-130a模拟物和鸡源PIK3CB野生型过表达质粒(gga-PIK3CB-WT)后荧光素酶活性下降约40%(P<0.05),miR-130a过表达导致PIK3CB蛋白水平极显著降低(P<0.01),而抑制miR-130a能极显著增加PIK3CB蛋白水平(P<0.01)。miR-130a过表达降低了雌二醇(E2)的分泌(P<0.05),抑制了BCL2基因和BCL2蛋白的表达(P<0.05)及细胞增殖(P<0.05),促进了BAX基因(P<0.05)和BAX蛋白的表达(P<0.01);抑制miR-130a的表达能促进雌二醇(E2)分泌(P<0.05),并促进BCL2蛋白表达(P<0.01)和细胞增殖(P<0.01),抑制BAX基因(P<0.05)和BAX蛋白表达(P<0.01)。[结论]miR-130a通过靶向PIK3CB减少类固醇激素合成并抑制鸡颗粒细胞凋亡。

关键词

鸡 / miR-130a靶基因 / 卵巢 / 颗粒细胞 / 凋亡 / 促卵泡激素(FSH)