基于重组聚合酶扩增技术的新德里番茄曲叶病毒快速检测方法的建立

摘要

[目的]新德里番茄曲叶病毒(tomato leaf curl New Delhi virus,To LCNDV)严重威胁我国茄科和葫芦科作物的生产，本研究旨在建立针对该病毒的快速检测方法，为病害的监测和防控奠定基础。[方法]针对To LCNDV基因组A的保守区域设计2对特异性引物，经过筛选后选用其中1对引物建立了针对To LCNDV的重组聚合酶扩增(recombinase polymerase amplification,RPA)检测方法。[结果]该方法可在42℃恒温条件下，仅用30 min完成对To LCNDV的指数级扩增，扩增产物既可通过琼脂糖凝胶电泳进行观察，又能通过测流层析试纸条实现检测结果的快速可视化。特异性检测发现，建立的RPA技术可特异性地检出To LCNDV，而检测不到番茄黄化曲叶病毒(tomato yellow leaf curl virus,TYLCV)、番茄金色花叶病毒(tomato golden mosaic virus,TGMV)、云南番茄曲叶病毒(tomato leaf curl Yunnan virus,TLCYn V)和中国南瓜曲叶病毒(squash leaf curl China virus,SLCCNV)等侵染茄科和葫芦科作物的其他DNA病毒。另外，在测试灵敏度时发现，当模板DNA浓度稀释到5×10-7ng时RPA仍能检测阳性结果，而常规聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)检测的最低模板含量仅为0.05 ng，说明RPA检测To LCNDV的灵敏度显著高于常规PCR。[结论]本研究所研发的To LCNDV快速检测方法为建立该病毒的早期监测预警和综合防控技术体系奠定了基础。

关键词

新德里番茄曲叶病毒 / 重组聚合酶扩增技术 / 快速检测 / 早期监测预警

基金资助

国家重点研发计划项目(2022YFD1401200); 南京农业大学大学生创新创业训练计划项目植物生产中心专项(ZKF202306)