猪C反应蛋白原核表达及单克隆抗体制备

摘要

[目的]本研究旨在制备猪C反应蛋白(C-reactive protein,CRP)的单克隆抗体，为建立监测猪血清中CRP浓度的血清学方法提供生物材料。[方法]优化CRP基因并克隆至原核表达载体p ET28a，再将分子伴侣质粒p TF16与重组质粒共转化并表达重组CRP，将该蛋白作为免疫原免疫BALB/c雌鼠，通过细胞融合、间接ELISA筛选，得到分泌抗重组CRP的杂交瘤细胞，制备单克隆抗体，进行效价测定及亚型鉴定;采用Western blot检测其特异性，进行生物素标记，制备生物素标记单克隆抗体。[结果]成功构建重组质粒及重组表达载体，经细胞融合和亚克隆成功获得2株分泌抗重组猪CRP单克隆抗体的杂交瘤细胞，分别命名为CRP-Mab1和CRP-Mab2,2株杂交瘤细胞上清液效价分别为1∶409 600和1∶204 800。Western blot结果显示，2株单克隆抗体均能与重组猪CRP进行特异反应。亚型鉴定结果显示，CRP-Mab1抗体轻链属于κ型，重链属于Ig G1型; CRP-Mab2单克隆抗体轻链属于κ型，重链属于Ig M型。获得生物素标记的单克隆抗体CRP-Mab1-Bio，其效价可达1∶12 800。[结论]成功制备2株针对重组猪CRP的单克隆抗体，并进行生物素标记，为猪血清CRP浓度检测及炎症监测方法的开发提供了重要的生物材料。

关键词

C反应蛋白 / 原核表达 / 分子伴侣 / 单克隆抗体

基金资助

国家自然科学基金项目(32273009,31973004); 国家重点研发计划项目(2021YFD1800404); 江苏省农业科技自主创新项目[CX(23)1041]; 中央高校基本科研业务费专项资金(KJJQ2025003)