树莓果肉多糖RPP-1对RAW264.7细胞免疫功能的影响

摘要

[目的]本研究旨在探究树莓果肉多糖RPP-1的体外免疫活性，并结合转录组学初步分析RPP-1免疫调节的作用机制。[方法]以来源于树莓果肉的多糖组分RPP-1为试验材料，分别采用CCK-8法和荧光探针法测定RPP-1对小鼠巨噬细胞RAW264.7细胞活力和吞噬能力的影响，利用RT-qPCR和ELISA分别从转录和蛋白质水平检测RPP-1对RAW264.7细胞上清液中NO和细胞因子的作用。同时，采用转录组学对差异表达基因(differentially expressed genes, DEG)进行基因本体(gene ontology, GO)功能注释、京都基因与基因组百科全书(Kyoto encyclopedia of genes and genomes, KEGG)富集分析和蛋白质-蛋白质相互作用(protein-protein interaction, PPI)网络分析。[结果]RPP-1能显著促进小鼠巨噬细胞RAW264.7的活力和吞噬能力，并明显增强细胞培养上清液中的NO、IL-6、IL-1β和TNF-α水平，提高iNOS、TNF-α、IL-6和IL-1β mRNA的相对表达水平，显示出较强的体外免疫增强作用。转录组学分析发现，与空白组相比，经RPP-1处理的RAW264.7细胞中共有286个与免疫调节相关的DEG,其中111个DEG下调，175个DEG上调；GO功能注释结果表明这些DEG主要参与细胞过程、生物调节、代谢过程、发育过程和免疫系统过程；KEGG富集分析结果显示差异基因显著富集于系统性红斑狼疮、细胞因子-细胞因子受体相互作用和TNF信号通路；PPI网络分析发现枢纽基因为IL-6、IL-1β、Rad51ap1、H2afx、Birc5、Ccl5和Pbk。[结论]树莓果肉多糖RPP-1对小鼠巨噬细胞RAW264.7具有免疫增强作用，结合体外活性试验与转录组学分析结果，RPP-1的免疫增强作用可能通过细胞因子-细胞因子受体相互作用及TNF信号传导途径调节实现，且其关键基因为IL-6、IL-1β。

关键词

树莓果肉多糖 / RPP-1 / RAW264.7 / 体外免疫调节 / 转录组学

基金资助

“西部之光”人才培养计划项目; 青海省科技厅基础研究项目(2019-ZJ-953Q)