GR介导的DNA甲基化修饰在甘草酸缓解小鼠肝炎中的作用

摘要

[目的]本文旨在探索糖皮质激素受体(glucocorticoid receptor, GR)与DNA甲基化5mC修饰在甘草酸(glycyrrhizic acid, GA)缓解肝炎中的作用。[方法]将ICR雄性小鼠随机分为对照组(CON)、LPS处理组(LPS)和GA预防缓解组(GA),每组9只。GA组小鼠灌胃甘草酸，CON组与LPS组小鼠灌胃等量生理盐水，持续7 d。随后LPS组与GA组小鼠腹腔注射LPS,CON组小鼠腹腔注射等量生理盐水，6 h后采样。首先，每组随机选取6只小鼠采集血液和肝组织，测定血清生化指标和炎性因子，检测肝组织内炎性因子水平(反映肝炎模型建立)。其次，每组另取3只小鼠分离原代枯否细胞(kupffer cell, KC),通过qPCR、Dot blot、Western blot测定KC中IL-1β和IL-6基因的表达、5mC修饰水平、GR蛋白表达水平，反映GR与5mC修饰参与GA缓解肝炎。最后在体外培养的KC中验证体内试验结果，并通过ChIP-PCR检测GR与DNA去甲基化酶(ten-eleven translocation 2,TET2)启动子的结合情况(反映GR与5mC修饰在GA缓解肝炎中的作用机制)。[结果]GA缓解LPS诱导的小鼠肝炎，表现在肝脏炎性细胞浸润减少、血清AST和ALT活性降低(P<0.05)、血清IL-6和IL-1β含量降低(P<0.01)、肝脏IL-6和IL-1β mRNA表达降低(P<0.01)。在肝脏分离的原代KC中，GA抑制KC中IL-6和IL-1β基因的表达，并激活GR的基因与蛋白表达，同时上调5mC修饰水平。随后的ChIP-PCR结果表明GR通过抑制TET2的表达来调控KC中的5mC修饰水平。[结论]GA通过抑制KC激活缓解LPS诱导的小鼠肝炎，这个过程中与GR的激活后上调5mC修饰有关。

关键词

甘草酸 / 小鼠 / 肝炎 / 糖皮质激素受体 / 5mC

基金资助

国家自然科学基金项目(31972638)