猪链球菌多血清型保守毒力因子的筛选与鉴定

摘要

[目的]本研究旨在筛选猪链球菌优势血清型菌株中保守性的毒力因子，为猪链球菌多血清保护性疫苗开发提供物质基础。[方法]以分离自我国的72株猪链球菌分离株建库，通过免疫信息学和泛基因组学等方法，筛选猪链球菌血清型2、3、5、7、9和31中保守的毒力蛋白因子，并对保守的蛋白进行亚细胞定位以及抗原性分析；以猪链球菌2型ZY05719为研究对象，对未在猪链球菌中探究过的3个蛋白(DAC、S5nA、HtrA)进行鉴定，通过生物信息学分析、构建缺失株、荧光定量PCR、生长曲线测定、小鼠攻毒等试验，评价以上3个基因对猪链球菌生长及毒力的影响。[结果]经过序列比对和核心基因组分析，共筛选出692个保守蛋白，其中有10个是完全位于猪链球菌细胞壁或者细胞外的多血清型保守的毒力因子，抗原性评估结果表明其均具有良好的抗原性。通过自然转化的方法构建了3个新毒力因子(DAC、S5nA、HtrA)的缺失株ΔDAC、ΔS5nA、ΔHtrA和互补株C-ΔDAC、C-ΔS5nA。荧光定量PCR结果表明，缺失株及互补株均构建成功；生长曲线显示3个毒力因子缺失后并不影响菌株的生长。小鼠攻毒试验显示，野病毒株感染组小鼠在24 h内死亡率为100%,3个缺失株ΔDAC、ΔS5nA、ΔHtrA感染后小鼠的死亡率分别为43%、57%、43%,互补株感染后48 h内小鼠的死亡率均为100%,表明这3个毒力因子缺失后，猪链球菌的毒力明显减弱。[结论]DAC、S5nA、HtrA在猪链球菌血清型2、3、5、7、9和31中高度保守，且影响猪链球菌的毒力，可作为猪链球菌亚单位疫苗的潜在候选靶点。

关键词

猪链球菌 / 多血清型 / 毒力因子 / 毒力 / 疫苗