二甲双胍通过促进醛酮还原酶AKR1C3降解抑制肝细胞癌恶性进展的机制研究

摘要

为阐明二甲双胍（MET）通过调控醛酮还原酶AKR1C3的降解，从而抑制肝细胞癌（HCC）恶性进展的作用机制，首先评估不同肝癌细胞系对MET的敏感性与其AKR1C3基础表达水平的相关性；通过Western blot分析发现MET可显著降低AKR1C3蛋白水平，并加速其降解速率；采用细胞热转移（CETSA）技术证实MET与AKR1C3蛋白存在相互作用；利用蛋白酶体抑制剂MG132和溶酶体抑制剂氯喹（CQ）筛选降解途径，结合HBSS饥饿诱导自噬模型，证实MET通过自噬溶酶体途径介导AKR1C3降解；泛素化实验显示MET能特异性增强AKR1C3的K63连接型多聚泛素化修饰；通过p62基因敲低实验、免疫共沉淀及免疫荧光共定位分析，证实自噬受体p62在介导MET诱导的AKR1C3降解中起关键作用；使用AMP依赖的蛋白激酶（AMPK）抑制剂Compound C证明MET对AKR1C3的调控作用独立于经典AMPK信号通路。实验结果表明，二甲双胍通过结合AKR1C3促进其泛素化修饰，增强AKR1C3与自噬受体p62的结合，进而选择性自噬途径降解AKR1C3蛋白，最终抑制肝癌细胞的恶性表型，此调控机制不依赖于二甲双胍经典的AMPK激活途径。

关键词

肝细胞癌 / 二甲双胍 / AKR1C3 / 自噬

基金资助

国家自然科学基金项目（No.82473962）; 神经与肿瘤药物研发全国重点实验室开放课题面上项目（SKLSIM-2024150）