基于滚环扩增的核酸载体靶向递送化疗药物的研究

张如燕; 张子辰; 张国栋; 张志庆

中国药科大学学报 ›› 2025, Vol. 56 ›› Issue (3) : 312 -320.

张如燕, 张子辰, 张国栋, 张志庆

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摘要

化疗药物普遍缺乏特异性，开发一种可主动靶向递送化疗药物、对生物体无免疫原性的载体越来越受到人们的关注。本研究通过滚环扩增技术（rolling circle amplification, RCA）将合成的具有串联重复序列的DNA长单链与几条包含适配体AS1411的短链DNA杂交来构筑含有多价适配体的核酸载体（multivalent aptamer, Multi-Apt），利用其双螺旋结构大量负载抗肿瘤药物阿霉素（doxorubicin, Dox），用于靶向治疗小鼠黑色素瘤细胞（B16细胞）。通过琼脂糖凝胶电泳优化了RCA产物与短链的结合比例，利用酶标仪探究了Dox的负载及释放，并采用荧光显微镜、流式细胞术、酶标仪、CCK-8法和划痕实验考察了Multi-Apt-Dox对B16细胞的靶向性和生长抑制情况。实验结果显示，RCA产物与3条短链的最佳物质的量比为1∶50。荧光显微镜照片、流式细胞术和酶标仪实验结果表明，每个Multi-Apt可负载约200个Dox分子，而且其对B16细胞的亲和性是单价适配体的46倍。细胞实验表明，Multi-Apt在细胞内降解并释放药物后诱导产生选择性细胞毒性，从而极大降低Dox对正常细胞的毒性，为肿瘤治疗的靶向给药提供一种新的策略。