基因工程疟原虫P.bzoGFP的构建及其生物特性

摘要

目的 构建动合子阶段表达绿色荧光蛋白的基因工程疟原虫，为该阶段相关的研究提供工具虫株。方法 构建含有GFP基因序列和pb25基因位点重组同源臂的打靶载体，线性化后电转染至伯氏疟原虫P.berghei。经药物筛选后使用有限稀释法进行克隆，利用PCR进行基因型鉴定。通过观察记录感染小鼠的发病情况、疟疾血症、红内期各阶段和合子、动合子的形态发育，分析基因工程疟原虫的生物学特性。结果 基因工程伯氏疟原虫P.bzoGFP,经PCR基因型鉴定与预期一致，且能在动合子阶段表达绿色荧光蛋白。P.bzoGFP与野生型疟原虫在红细胞内的形态和体外培养合子、动合子的形态均无差异，感染小鼠的生存时间无统计学差异（χ²=0.309,P>0.05）,体外培养动合子的转化情况无显著差别（t=0.341,P>0.05）。结论 成功构建基因工程疟原虫P.bzoGFP,其生物学特性与野生型疟原虫无明显不同，能够在合子形成后有效表达GFP,无需抗体标记，可直接用于疟疾传播阻断效果的评估等此阶段相关研究。

关键词

疟疾 / GFP / 基因工程 / 动合子

基金资助

国家自然科学基金项目(82101867); 济宁医学院大学生创新训练计划项目(cx2023077z)