银杏达莫对大鼠小肠缺血-再灌注损伤的保护作用及其机制

摘要

目的 探究银杏达莫预处理对大鼠小肠缺血-再灌注损伤的影响及相关机制。方法 采用结扎肠系膜上动脉模拟大鼠小肠缺血-再灌注损伤模型，根据随机数字表法将36只Wistar大鼠随机分为假手术组(Sham组),小肠缺血-再灌注模型组(I/R组),银杏达莫干预组(Gin组),每组12只。建模前7d Gin组按3.6mL/1kg给药量进行腹腔注射，一天一次，连续7d, Sham组、I/R组注射等剂量生理盐水。苏木素-伊红(HE)染色观察细胞状态，天狼星红染色和Masson染色观察胶原纤维；血液生化检测血清中超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)含量变化；免疫组化检测小肠组织中白介素6(IL-6)、白介素10(IL-10)、Bcl-相关X蛋白(Bax)、B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)的蛋白表达变化；聚合酶链式反应(PCR)检测Bax、Bcl-2的mRNA表达水平；免疫印迹法(Western blot)检测小肠组织中Smad蛋白(Smad)和Bcl-2,Bax的蛋白表达水平。结果 与Sham组相比，I/R组小肠组织中SOD活性[(125.34±59.58)U/L]降低(P<0.05),MDA含量[(6.24±0.73)U/L]增加(P<0.05);与I/R组相比，Gin组小肠组织中SOD活性[(262.62±22.57)U/L]增强(P<0.05),MDA含量[(2.88±0.74)U/L]降低(P<0.05)。Sham组小肠黏膜结构正常，绒毛完整，I/R组可见大量裸露绒毛，绒毛出现水肿，脱落受损严重，并且有炎性细胞浸润现象，Gin组小肠绒毛结构破坏较轻，可见黏膜轻微水肿和轻微脱落，损伤较轻；天狼星红和Masson染色发现I/R组中胶原纤维较Sham组明显增多，Gin组中的胶原纤维较I/R组有所减轻；免疫组化结果显示，I/R组IL-6、IL-10、Bax、Bcl-2阳性面积占比[(32.24±7.07)%、(10.23±1.63)%、(40.35±7.07)%、(24.64±8.04)%]均高于Sham组[(4.24±1.31)%、(3.77±0.91)%、(2.35±0.87)%、(3.25±0.87)%](P<0.05),Gin组IL-6、Bax阳性面积[(10.23±0.71)%、(6.71±1.41)%]低于I/R组(P<0.05),IL-10、Bcl-2阳性面积[(32.24±8.16)%、(48.40±7.07)%]均高于I/R组(P<0.05);与Sham组相比，I/R组大鼠小肠组织中Bax、Bcl-2、Akt、Smad mRNA表达水平均上调(P<0.05),与I/R组比较，Gin组Bax和Smad mRNA表达水平降低(P<0.05),Bcl-2和Akt蛋白相应的mRNA表达水平上调(P<0.05);与Sham组相比，I/R组大鼠小肠组织中Akt、Smad、Bax、Bcl-2蛋白表达水平上调(P<0.05)。与I/R组比较，Gin组大鼠小肠组织中Akt和Bcl-2蛋白表达水平显著上调(P<0.05),Smad和Bax蛋白表达水平显著降低(P<0.05)。结论 银杏达莫通过调节抗氧化酶活性、减轻炎症反应以及抑制细胞凋亡相关蛋白的表达对大鼠小肠缺血-再灌注损伤有保护作用。

关键词

银杏达莫 / 小肠缺血-再灌注 / TGF-β/Smad / PI3K/Akt