地锦叶斑病菌鉴定及LAMP快速检测体系的建立

摘要

【目的】明确引起云南玉龙县地锦叶斑病的病原种类，并建立快速检测方法。【方法】采用组织分离法分离病原菌，并依据科赫氏法则确定地锦叶斑病病原，通过形态学特征及多基因联合构建系统发育树，明确病原菌的分类地位；以病原菌的Alt a1基因序列为靶标设计特异性引物建立环介导等温扩增(Loop-mediated isothermal amplification,LAMP)检测方法。【结果】地锦叶斑病病原菌鉴定为链格孢菌Alternaria alternata。建立的LAMP反应体系可特异有效地检测出地锦叶斑病菌，该体系最佳反应温度为65℃、最佳反应时间为50 min、最低检测灵敏度为1 pg/μL。使用该体系对人工接种病原菌不同时间的地锦叶片进行链格孢LAMP检测，检出时间为接种12 h及以上。【结论】本研究可为地锦叶斑病的早期检测和科学防控提供理论依据。

关键词

地锦 / 叶斑病 / 链格孢菌 / 病原鉴定 / LAMP体系