鸡circSFMBT2克隆及对DF-1细胞增殖的影响

摘要

【目的】验证鸡circSFMBT2的环形结构，探究其表达规律及功能。【方法】以麒麟鸡和DF-1细胞为研究对象，根据反向剪切位点序列特征设计引物，通过PCR和测序验证circSFMBT2的环形结构。通过RNase R和反转录试验分析circSFMBT2的基本特性，利用qRT-PCR探究不同组织、不同时期circSFMBT2的表达水平。通过构建过表达载体，结合qRT-PCR、Edu和CCK-8等试验，探究circSFMBT2对鸡DF-1细胞增殖的影响。【结果】鸡circSFMBT2全长827 nt，由SFMBT2基因外显子12～18环化形成。RNase R耐受性试验表明，circSFMBT2不易被RNase R降解，随机引物对circSFMBT2的反转录效率是Oligo-d（T）₁₈引物的8倍。组织表达谱表明，circSFMBT2在麒麟鸡14胚龄以及1周龄的肝脏和脾脏中高表达、在胸肌和腿肌中低表达。circSFMBT2在胸肌和腿肌的时序表达谱表明，circSFMBT2在胚胎时期表达量较高，出生后表达量迅速下降。在DF-1细胞中circSFMBT2过表达48 h后，增殖标记基因PCNA和CCND1的表达量分别较对照组上调85%和92%。Edu和CCK-8细胞增殖试验表明，鸡circSFMBT2可以促进细胞增殖进程。【结论】circSFMBT2是鸡SFMBT2基因的一个环状转录本，可以促进DF-1细胞的增殖，研究结果为深入探究鸡circSFMBT2的生物学功能和作用机制奠定了基础。

关键词

鸡 / SFMBT2 / 环状RNA / DF-1细胞 / 细胞增殖