基于PCR-CRISPR/Cas12a技术的肠炎沙门菌快速检测方法

摘要

【目的】针对食源性病原菌肠炎沙门菌Salmonella enteritidis，开发一种CRISPR（Clustered regularly interspaced short palindromic repeat）技术结合聚合酶链式反应（Polymerase chain reaction,PCR）的检测方法，以实现肠炎沙门菌的早期快速诊断和防控。【方法】根据保守基因sdf I序列，进行PCR引物筛选。使用不同质量浓度的肠炎沙门菌基因组进行灵敏度测试；利用大肠埃希菌Escherichia coli、金黄色葡萄球菌Staphylococcus aureus、多杀性巴氏杆菌Pasteurella multocida、粪肠球菌Salmonella choleraesuis、猪霍乱沙门氏菌Enterococcus faecalis基因组进行特异性检验。最后，使用建立的方法检测小肠样品中肠炎沙门菌的污染情况。【结果】该方法可检出小肠样品中的肠炎沙门菌，检测限为1.72×10～0μL^-1，特异性良好，且与大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、多杀性巴氏杆菌、粪肠球菌、猪霍乱沙门氏菌均无交叉反应。【结论】本研究建立了一种较为轻便、可用于早期诊断肠炎沙门菌的方法，具有良好的灵敏度和特异性，为肠炎沙门菌快速诊断提供了新方法。

关键词

肠炎沙门菌 / sdfI基因 / 聚合酶链式反应 / CRISPR/Cas12a系统