新型CD163截短型基因编辑猪的制备及抗猪繁殖与呼吸综合征效果评估

摘要

【目的】运用CRISPR/Cas9基因编辑结合体细胞核移植技术，培育CD163的SRCR5结构域Δ525-529（AHFGE）五氨基酸缺失的大白猪，并评估其抗猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）感染能力。【方法】在细胞试验阶段，分别用表达野生型CD163（pCMV-pCD163-neo）和截短型CD163（pCMV-pCD163-ΔAHFGE）的质粒转染HEK-293T细胞，24 h后接种PRRSV JXA1毒株。感染24 h后，通过荧光观察和免疫荧光染色评估感染情况。在动物试验阶段，共纳入20头猪只，并分为3组：AHFGE精准缺失组（n=6）、野生型攻毒对照组（n=9）、野生型未攻毒空白对照组（n=5）。AHFGE精准缺失组与野生型攻毒对照组均肌内注射2 mL PRRSV JXA1毒株悬液(毒价为5×10～4 TCID₅₀/mL)。攻毒后连续21 d对各组猪只进行监测，主要观察指标包括临床症状表现、直肠温度变化、血清中PRRSV病毒载量以及特异性抗体水平等。【结果】成功构建了CD163的SRCR5结构域Δ525-529（AHFGE）五氨基酸缺失的基因编辑大白猪。基因编辑猪总体生长情况正常，未观察到显著的表型异常。动物攻毒试验显示，基因编辑猪对高致病毒株PRRSV JXA1抗病能力得到提升，其疾病表型、体内病毒载量、抗体水平和死亡率都明显低于野生型同品种对照。【结论】AHFGE是介导PRRSV感染的关键氨基酸残基。本研究获得的基因编辑猪可作为培育抗PRRSV猪群的育种材料，为评估其育种价值和应用潜力奠定了基础。

关键词

猪 / CD163截短型 / 基因编辑 / AHFGE / PRRSV / 抗病育种