MEG3、miR-210在深低温停循环所致脑损伤中的作用

摘要

目的：通过体外实验探讨母系表达基因3(Maternally expressed gene 3, MEG3)、微小RNA-210(microRNA-210,miR-210)在深低温停循环（Deep hypothermic circulatory arrest, DHCA）所致脑损伤发病机制中的作用。方法：将PC12细胞分为对照组（Control组）、Si-MEG3-NC组、Si-MEG3＿1组、Si-MEG3＿2组和Si-MEG3＿3组，严格按照干扰载体转染操作规程构建干扰表达MEG3的载体细胞，采用qRT-PCR检测干扰效率，选择干扰效率高的干扰表达MEG3的载体细胞进行实验。将PC12细胞分为对照组、氧-葡萄糖剥夺/复氧（Oxygen-glucose deprivation/reoxygenation, OGD/R）组，对OGD/R组细胞进行OGD/R模型构建，对Si-MEG3-NC细胞、Si-MEG3细胞进行OGD/R模型构建分别设为OGD/R+Si-MEG3-NC组、OGD/R+Si-MEG3组。⑴采用qRT-PCR检测各组细胞MEG3 mRNA及miR-210的表达；⑵采用CCK8法检测各组细胞增殖能力；⑶采用流式细胞术法检测各组细胞凋亡能力；⑷采用双荧光素酶实验检测各组细胞荧光素酶活性。结果：⑴与对照组比较，OGD/R组、OGD/R+Si-MEG3-NC组MEG3mRNA表达增加，OGD/R+Si-MEG3组MEG3 mRNA表达降低，差异有统计学意义（P<0.01）；与OGD/R组比较，OGD/R+Si-MEG3组MEG3 mRNA表达降低，差异有统计学意义（P<0.01）。与对照组比较，OGD/R组、OGD/R+Si-MEG3-NC组miR-210表达降低，OGD/R+Si-MEG3组miR-210表达增加，差异有统计学意义（P<0.01）；与OGD/R组比较，OGD/R+Si-MEG3组miR-210表达增加，差异有统计学意义（P<0.01）。⑵与对照组比较，OGD/R组、OGD/R+Si-MEG3-NC组细胞增殖能力降低，OGD/R+Si-MEG3组细胞增殖能力增加，差异有统计学意义（P<0.01）；与OGD/R组比较，OGD/R+Si-MEG3组细胞增殖能力增加，差异有统计学意义（P<0.01）。⑶与对照组比较，OGD/R组、OGD/R+Si-MEG3-NC组细胞凋亡能力增加，OGD/R+Si-MEG3组细胞凋亡能力降低，差异有统计学意义（P<0.05）；与OGD/R组比较，OGD/R+Si-MEG3组细胞凋亡能力降低，差异有统计学意义（P<0.01）。⑷Encori数据库预测显示，MEG3与miR-210存在互补结合位点，MEG3包含miR-210的结合序列。相较于NC mimics组，miR-210 mimics组转染pGL3-WT-lncRNA-MEG3-luc(luciferase)载体的PC12细胞的荧光素酶活性显著降低（P<0.05），而转染pGL3-MUT-lncRNA-MEG3-luc(luciferase)载体的PC12细胞的荧光素酶活性差异无统计学意义（P>0.05）。结论：MEG3通过调控miR-210参与PC12细胞在OGD/R条件下的凋亡和增殖能力，可能在DHCA脑损伤中发挥重要作用。

关键词

微小RNA-210 / 母系表达基因3 / 深低温停循环 / 脑损伤