TP53基因工程抗体的构建、表达筛选及表征鉴定

摘要

目的：利用基因工程抗体技术制备TP53重组抗体，并进行临床病理诊断应用的初步探究。方法：将杂交瘤来源的TP53单克隆抗体重链及轻链可变区基因分别与pGEM-T载体连接，测序分析并选择有效重链及轻链序列分别与pFUSEss-CHIg-mG2B、pFUSE2ss-CLIg-mk及pcDNA3.4载体连接。利用ExpiCHO-S?Expression System进行真核表达，经Protein A柱纯化获得TP53重组抗体。最后将TP53重组抗体和商品化TP53抗体进行蛋白质免疫印迹（Western blot,WB）和免疫组织化学（Immunohistochemistry,IHC）应用的初步探究。结果：通过抗体表达纯化获得TP53重组抗体，液相色谱-质谱测定结果显示TP53轻链/重链分子量分别为25 kDa和53 kDa,ELISA效价为1∶2 180 000，亲和力测定Ka值为6.6×10¹⁰ L·mol^-1。WB结果显示TP53重组抗体与商品化TP53抗体表达结果一致。IHC结果显示TP53重组抗体和商品化TP53抗体识别靶标均定位于细胞核，在人肾癌、人乳腺叶状腺癌、人乙状结肠腺癌及小鼠肝癌中的检测结果一致，且TP53重组抗体在人高分化鳞癌、人肝细胞癌和人乳腺癌中的免疫组化检测效果优于商品化的TP53抗体。结论：本研究成功制备了小鼠抗人TP53重组抗体，并为临床病理诊断提供初步的数据支持。

关键词

TP53单克隆抗体 / 抗体,单克隆 / 基因工程抗体技术 / 载体构建 / 免疫组织化学