Nrf2基因编辑小鼠模型的构建

摘要

目的：构建核因子-红细胞2相关因子2(Nuclear factor-erythroid 2 related factor 2,Nrf2)全身性敲除（Nrf2-KO）、心肌细胞特异性敲除（Nrf2-Flox）和心肌细胞过表达（Nrf2-CTG）3种基因编辑小鼠，为探究Nrf2在心血管代谢性疾病中的具体作用机制提供研究工具。方法：利用CRISPR/Cas9技术构建Nrf2-KO小鼠和Nrf2-Flox小鼠，利用转基因技术构建Nrf2-CTG小鼠。基因编辑小鼠7～10日龄时剪脚趾组织提取DNA，用PCR和琼脂糖凝胶电泳进行基因型判定并测序。结果：⑴Nrf2-KO F0代、F1代和F2代小鼠基因组扩展样本在目的条带处（约750 bp）均有清晰单一的阳性条带，野生型小鼠在目的条带处（约2 931 bp）有阳性条带；采用Nrf2-wt-F1/Nrf2-wt-R1引物对F2代小鼠基因组野生型小鼠在目的条带处（约495 bp）有阳性条带，Nrf2-KO鼠无该目的条带。F0代小鼠基因组缺失碱基为Founder小鼠敲除的碱基；⑵Nrf2-Flox F0代、F1代小鼠基因组扩展样本在目的条带处（约150 bp）均有清晰单一的阳性条带。野生型小鼠无该目的条带；⑶Nrf2-CTG F0代、F1代鼠基因组扩展样本在目的条带处（约251 bp）均有清晰单一的阳性条带，野生型小鼠无该目的条带。结论：利用CRISPR/Cas9技术和转基因技术成功构建Nrf2-KO小鼠模型、Nrf2-Flox小鼠模型及Nrf2-CTG小鼠模型。

关键词

核因子-红细胞2相关因子2 / 心肌细胞 / CRISPR/Cas9 / 基因编辑 / 小鼠