柚皮苷诱导卵巢癌细胞凋亡的机制研究

摘要

目的：探究柚皮苷在卵巢癌中的抗肿瘤活性并评估其潜在信号传导机制。方法：⑴将雌性Balb/c裸鼠随机分为6组：阴性对照组（PBS溶液）、0.5 mg·kg^-1柚皮苷组(柚皮苷0.5 mg·kg^-1)、1.0 mg·kg^-1柚皮苷组(柚皮苷1.0 mg·kg^-1)、2.0 mg·kg^-1柚皮苷组(柚皮苷2.0 mg·kg^-1)、阳性对照组(顺铂25.0 mg·kg^-1)、联合用药组(顺铂25.0 mg·kg^-1、柚皮苷2.0 mg·kg^-1)，取对数生长期的SKOV3细胞皮下注射Balb/c裸鼠，当肿瘤大小达到50 mm³时，按照分组情况在腹膜内注射相应试剂。给药10 d后处死并切除小鼠整个肿瘤，测量肿瘤大小及体积并通过RT-PCR检测各组肿瘤凋亡相关基因mRNA的表达。⑵将SKOV3细胞随机分为4组：阴性对照组（PBS溶液）、10μmol·L^-1柚皮苷组、20μmol·L^-1柚皮苷组、40μmol·L^-1柚皮苷组。ELISA检测各组相关蛋白表达。⑶取对数生长期SKOV3细胞，以每孔2×10～5个细胞接种于6孔板中。将SKOV3细胞随机分8组：空白对照组（不导入质粒及siRNA）、空质粒对照组、siRNA对照组、NF-κB过表达组、NF-κB siRNA组、P38MAPK过表达组、P38MAPK siRNA组、PKC抑制剂组。RT-PCR检测各组细胞P-gp和ERK mRNA表达。⑷对NF-κB过表达组和P38MAPK过表达组SKOV3细胞进行柚皮苷干预，测量各组细胞P-gp和ERK mRNA表达。结果：⑴给药10 d后，肿瘤体积及重量由大到小依次为阴性对照组、0.5 mg·kg^-1柚皮苷组、1.0 mg·kg^-1柚皮苷组、2.0 mg·kg^-1柚皮苷组、阳性对照组、联合用药组，且与阴性对照组相比，差异均有统计学意义（P<0.05）。⑵与阴性对照组相比，2.0 mg·kg^-1柚皮苷组、阳性对照组、联合用药组Caspase-3和Caspase-7 mRNA表达增加，差异均有统计学意义（P<0.05）；与阴性对照组相比，0.5 mg·kg^-1柚皮苷组、1.0 mg·kg^-1柚皮苷组、2.0 mg·kg^-1柚皮苷组、阳性对照组、联合用药组Bcl-2、Bcl-xl mRNA表达降低，差异均有统计学意义（P<0.05）；与阴性对照组相比，2.0 mg·kg^-1柚皮苷组、阳性对照组、联合用药组Cyclin D1、C-Myc和Survivin mRNA表达降低，差异均有统计学意义（P<0.05）。⑶与阴性对照组相比，40μmol·L^-1柚皮苷组PKC、P38MAPK、ERK、NF-κB、P-gp、COX-2蛋白表达降低，Caspase-3和Caspase-7蛋白表达增加，差异均有统计学意义（P<0.05）。⑷与空白对照组相比，空质粒及siRNA对照组的ERK和P-gp mRNA表达差异无统计学意义（P>0.05）,P38MAPK过表达组ERK mRNA表达增加，P38MAPK siRNA组及PKC抑制剂组ERK mRNA表达降低，NF-κB过表达组P-gp mRNA表达增加，NF-κB siRNA组及P-gp mRNA表达降低，差异均有统计学意义（P<0.05）。⑸与空质粒组比较，柚皮苷+P38MAPK过表达组PKC、ERK、COX-2 mRNA表达降低，差异均有统计学意义（P<0.05）,P38MAPK mRNA无明显差异；柚皮苷+NF-κB过表达组PKC、NF-κB、P-gp表达降低，Caspase-3、Caspase-7表达增加，差异均有统计学意义（P<0.05）。结论：柚皮苷能够通过抑制PKC所介导的不同信号路径调控卵巢癌细胞凋亡与生长，并具有剂量依赖性。

关键词

柚皮苷 / 蛋白激酶C / 卵巢癌 / 细胞凋亡