“补肾填精”中药复方改善脑瘫大鼠运动发育落后的机制研究

摘要

目的：探索“补肾填精”中药复方改善脑瘫儿运动发育落后的分子机制，为临床上采用中医药治疗脑瘫患儿提供科学依据。方法：对处于妊娠期16 d Wistar大鼠进行腹腔注射细菌脂多糖（Lipopolysaccharides,LPS）模拟宫内感染，并将孕鼠置于低氧环境下（92%氮气+8%氧气）处理2 h，以此建立妊娠期大鼠宫内感染合并缺氧模型。通过动物神经行为学测试，在子代大鼠中筛选获得幼年脑瘫大鼠。脑瘫模型幼鼠和正常幼鼠分别设置治疗组和对照组，共4个组别，每组动物10只；另取10只正常幼鼠不做任何处理，作为空白对照组。按1 g·（25 mL）^-1 ddH₂O的质量体积比配制免煎颗粒药。通过灌胃给予治疗组大鼠“补肾填精”中药复方水剂，给药剂量为5 mL·kg^-1老鼠体重，每日1次，连续灌服15 d。分别于给药后第5 d、第10 d和第15 d对大鼠的运动能力进行观察和评估。给药15 d后将大鼠处死，大鼠眼眶采血，ELISA检测各组动物外周血中炎症因子的水平，取脑组织，对mTOR相关信号通路分子进行免疫印迹检测。结果：悬吊试验结果显示，与空白对照组相比，脑瘫对照组的悬吊时间明显缩短（P<0.001）；与脑瘫对照组相比，脑瘫治疗组悬吊时间明显延长（P<0.001）；而正常治疗组与正常对照组相比，悬吊时间差异无统计学意义（P=0.064）。斜坡实验结果显示，与空白对照组相比，脑瘫对照组转头时间明显延长，差异有统计学意义（P<0.001）；与脑瘫对照组相比，脑瘫治疗组转头时间明显缩短，差异有统计学意义（P<0.001）；而正常治疗组与正常对照组相比，转头时间差异无统计学意义（P=0.863）。对各组别大鼠的体重进行监测，与空白对照组及正常对照组相比，正常治疗组体重无明显差异（P>0.05）；与空白对照组相比，脑瘫治疗组体重明显减轻（P<0.001）；与脑瘫对照组相比，脑瘫治疗组体重明显增加（P=0.031）。ELISA检测各组动物外周血中炎症因子的水平发现，与脑瘫对照组相比，脑瘫治疗组外周血中促炎因子TNF-α和IL-1β显著下降（P<0.001），但对IL-6的水平影响不大（P>0.05），而抗炎因子IL-4和IL-10显著升高（P<0.001）。WB方法检测各组大鼠神经组织中PI3K/AKT/mTOR信号通路相关蛋白表达水平发现，与脑瘫对照组相比，脑瘫治疗组PI3K表达增加，磷酸化AKT和mTOR表达增加，LC3-Ⅱ与LC3-Ⅰ比值降低，自噬相关蛋白p62表达增加（P<0.01）。结论：“补肾填精”中药复方可通过调控mTOR信号通路介导的神经细胞自噬，并抑制炎症的发生达到改善脑瘫幼年大鼠运动功能的效应。

关键词

脑瘫 / 中药复方 / 自噬 / 炎症损伤