短乳杆菌来源重组β-半乳糖苷酶初步分离纯化与酶学特性研究

摘要

将实验室克隆得到的E. coli BL21/pET28a-bga B-18重组菌株在IPTG的诱导下进行表达,对其表达的β-半乳糖苷酶性质进行研究.首先,通过离心收取重组菌菌体;其次,通过超声破碎菌体细胞,再用镍柱对重组蛋白质进行亲和层析;最后,收集层析液,再利用紫外分光光度计测定重组β-半乳糖苷酶活性,并研究其酶学性质.结果表明:该酶的最适反应温度为37℃,最适pH值为7.5;在温度30～50℃、pH 6.0～8.0范围内酶稳定性较好; Mg²⁺、Mn²⁺为其激活剂,Cu²⁺为其抑制剂;测得K_m=0.816 mmol/L,V_max=45.87 mmol/（L·min）.

关键词

β-半乳糖苷酶 / 诱导表达 / 分离纯化 / 酶学性质