构建转天冬酰胺酶基因菌株及其固体发酵产酶培养基优化

摘要

构建一株转L-天冬酰胺酶基因的里氏木霉重组菌株，并采用固体发酵的方法研究其发酵产酶。首先以贝莱斯芽孢杆菌质粒为骨架重组天冬酰胺酶基因，验证其天冬酰胺酶的表达；随后探讨不同培养基配方（配方1和配方2）发酵产酶效果，通过单因素和正交试验优化其优势产酶培养基。结果表明：构建的里氏木霉可以正确表达天冬酰胺酶；在固体培养基配方1和配方2中，重组的里氏木霉菌株发酵产天冬酰胺酶分别为4.52 U/g和2.21 U/g，配方1产酶量远高于配方2。因此，以配方1作为优选配方，通过单因素及正交试验对其进一步优化。配方1中，当麦麸与玉米芯的比例为3∶1、初始含水量为1∶4.4、初始pH值为5.5时，该里氏木霉转L-天冬酰胺酶基因重组菌株发酵产酶活力为5.965 U/g，与原配方相比，优化后的固体培养基发酵产酶活力提高了24.22%。

关键词

L-天冬酰胺酶 / 里氏木霉 / 正交试验优化 / 固体培养