肠安Ⅱ号在治疗肠易激综合征中的物质基础及分子机制

摘要

目的:探究肠安Ⅱ号在治疗肠易激综合征(IBS)中的物质基础及分子机制。方法:通过建立超高效液相色谱-三重四级杆质谱分析法联合使用技术(UPLC-QqQ-MS/MS)法测得肠安Ⅱ号中主要化合物数据，通过AutoDockTools 1.5.6软件将得到的化合物与聚合酶Ⅰ和转录本释放因子(PTRF)进行分子对接。体内试验将40只雄性大鼠随机分为正常组，模型组和肠安Ⅱ号低、中、高剂量组5组，每组8只。除正常组外，其余各组进行三硝基苯磺酸(TNBS)灌肠造模，构建IBS大鼠模型。造模成功后，正常组和模型组给予生理盐水灌胃，其余各组给予不同剂量的肠安Ⅱ号进行灌胃，每天1次，持续14 d。给药结束后，大鼠结肠组织进行HE染色观察其病理学变化。免疫荧光分析检测PTRF和Toll样受体4(TLR4)在大鼠结肠细胞中的表达情况；酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测血清中白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的表达水平。结果:色谱-质谱测得肠安Ⅱ号中主要含有10种成分，与PTRF进行分子对接后均能稳定结合，推测这10种成分是发挥作用的活性成分。体内实验发现造模前各组大鼠体质量差异无统计学意义(P>0.05),造模成功后，各组大鼠(除正常组)体质量均降低(P<0.01),精神萎靡。给药后，肠安Ⅱ号各剂量组较模型组精神状态、饮食量等方面均有不同程度改善，大鼠体质量较模型组均有不同程度增长(P<0.01),精神状态恢复。与模型组相比，肠安Ⅱ号各剂量组大鼠血清中IL-6、TNF-α的表达水平均降低(P<0.01)。模型组大鼠结肠细胞中PTRF和TLR4的表达量升高(P<0.05),肠安Ⅱ号可以降低结肠细胞中PTRF和TLR4的表达(P<0.05),减轻炎症反应。结论:肠安Ⅱ号含有多种活性成分，可能通过抑制PTRF的表达，从而减弱PTRF与TLR4的共表达，影响TLR4信号通路的表达。肠安Ⅱ号可能通过激活和调控PTRF/TLR4信号通路，从而抑制炎性因子的释放，对IBS产生治疗作用。

关键词

肠安Ⅱ号 / 肠易激综合征 / 分子对接 / 聚合酶Ⅰ和转录本释放因子 / 动物实验

基金资助

安徽省高校协同创新项目(GXXT-2020-024); 皖南医学院博士科研启动经费(WYRCQD2018009);皖南医学院横向课题(H202003)