lncRNA MIAT调节miR-206/NFAT5轴对急性脑梗死大鼠海马神经元增殖和凋亡的影响

摘要

目的:探究长链非编码RNA心肌梗死相关转录本(lncRNA MIAT)对急性脑梗死(ACI)大鼠海马神经元及miR-206/活化T细胞核因子5(NFAT5)轴的影响。方法:建立ACI大鼠模型并分离大鼠海马组织,培养神经元细胞,然后对ACI神经元进行转染。研究分为Control组(正常对照组)、ACI组(未转染模型组)、oe-NC组(转染过表达MIAT阴性对照组)、oe-MIAT组(转染过表达MIAT组)、oe-MIAT+miR mimic-NC组(共转染过表达MIAT和miR-206 mimic阴性对照组)、oe-MIAT+miR-206 mimic组(共转染过表达MIAT和miR-206 mimic组)。qRT-PCR检测ACI神经元中MIAT、miR-206、NFAT5的mRNA水平;MTT法检测神经元增殖活性;流式细胞术检测神经元凋亡率;Western blot检测神经元中凋亡相关蛋白及NFAT5的表达;双荧光素酶活性实验分别验证miR-206和MIAT、NFAT5的靶向关系。结果:ACI组相较于Control组、oe-MIAT+miR-206 mimic组相较于oe-MIAT组和oe-MIAT+miR mimic-NC组,其MIAT、NFAT5 mRNA水平及NFAT5、Bcl-2蛋白表达、神经元增殖活性均降低,miR-206表达、细胞凋亡率、神经元中cleaved caspase-3、Bax蛋白表达均升高(P<0.05);与ACI组和oe-NC组相比,oe-MIAT组则反之(P<0.05)。网站预测结果显示miR-206与MIAT、NFAT5均存在靶向结合位点,且MIAT-WT或NFAT5-WT与miR-206 mimic共转染的细胞相对荧光素酶活性均低于与miR-206 mimic-NC共转染的荧光素酶活性(t=21.571、17.318,P<0.001)。结论:过表达MIAT能够通过靶向下调miR-206表达,上调NFAT5的表达,促进ACI大鼠神经元增殖,抑制其凋亡。

关键词

急性脑梗死 / 心肌梗死相关转录本 / miR-206/活化T细胞核因子5(NFAT5)轴 / 神经元 / 增殖 / 凋亡