BORCS5基因敲除对U251胶质瘤细胞溶酶体定位和细胞侵袭迁移的影响

摘要

目的:利用CRISPR/Cas9技术构建BLOC-1相关复合物亚基5(BORCS5)基因敲除的U251胶质瘤细胞模型，探究其对胶质瘤细胞侵袭迁移能力的影响以及可能的分子机制。方法:根据BORCS5基因序列设计靶点引物，构建基因敲除质粒并转染U251细胞，通过流式分选获得阳性单细胞进行培养，再经PCR扩增、测序和Western blot验证基因敲除效果，最终筛选BORCS5完全敲除的U251细胞株。采用Transwell实验分析BORCS5敲除对细胞侵袭迁移能力的影响；通过Lysotracker染色观察溶酶体定位；利用质粒共转染分析相关分子的亚细胞定位情况。结果:成功获得BORCS5基因敲除的细胞株(M1)。敲除BORCS5后，U251胶质瘤细胞的侵袭与迁移能力均降低(P<0.01),溶酶体呈现核周聚集。BORCS5自身不定位于溶酶体上，但其敲除会改变ARL8B的溶酶体定位。结论:BORCS5以不依赖于其自身溶酶体定位的方式，调节ARL8B在溶酶体上的定位，并通过ARL8B参与U251胶质瘤细胞的溶酶体正常定位和恶性表型的调控。

关键词

BLOC-1相关复合物亚基5 / U251细胞 / 溶酶体 / 侵袭 / 迁移

基金资助

安徽省高校科研项目(2024AH051937); 安徽省卫生健康科研项目(AHWJ2023A20504); 皖南医学院重点项目科研基金(WK2024ZZD24)