道地药材祁门白术ISSR-PCR反应体系建立及引物的筛选

摘要

目的:以安徽祁门道地药材白术为研究对象，建立适用于祁门白术遗传多样性分析的简单重复序列区间(ISSR)分子标记技术体系。方法:采用正交试验结合单因素实验设计，对2×Taq PCR Master Mix、引物及模板DNA浓度进行优化，筛选出多态性高、稳定性好的引物。结果:在10.0μL反应体系中，2×Taq PCR Master Mix 5.5μL、模板DNA 0.6μL、引物1.2μL为最佳用量，最佳循环次数为40次，最佳电泳时间为50 min。所建立的PCR反应体系扩增条带比较清晰，多态性好；利用该体系从100条ISSR引物中进行初筛和复筛，筛选出9条相对清晰稳定、多态性较好的引物。结论:本研究优化建立的ISSR-PCR反应体系稳定可靠，可为祁门白术种质资源鉴定及遗传多样性分析提供技术支撑。

关键词

祁门白术 / 简单重复序列区间 / PCR优化 / 引物筛选 / 道地药材

基金资助

安徽省高等学校自然科学研究重点项目(KJ2019A1083); 安徽省高校优秀青年人才支持计划重点项目(gxyqZD2022104)