三阴性乳腺癌葡萄糖-6-磷酸脱氢酶琥珀酰化及其修饰位点突变体的构建

摘要

目的 分析乳腺癌中葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G6PD)琥珀酰化水平并构建相应修饰位点正向及负向突变体，为后续功能研究提供实验基础。方法 利用蛋白质修饰组学方法检测不同乳腺癌细胞及正常乳腺上皮细胞中G6PD琥珀酰化水平；以野生型G6PD表达载体为模板利用基因定点突变方法构建G6PD修饰位点正向及负向表达载体；利用阳离子脂质体转染方法将野生型、修饰位点突变型G6PD及对照载体分别转染至293T细胞，并采用Western blot分析蛋白表达及琥珀酰化修饰情况。结果 同正常乳腺上皮细胞及非三阴性乳腺癌细胞相比，G6PD在三阴性乳腺癌中呈现多位点的高琥珀酰化水平；构建的G6PD各修饰位点突变体均发生预期的氨基酸突变；同对照载体相比，转染野生型及修饰位点突变体的细胞中G6PD表达水平明显增加。结论 三阴性乳腺癌G6PD呈多位点的高琥珀酰化水平，成功构建G6PD修饰位点突变体并实现其在293T细胞中的表达。

关键词

乳腺癌 / G6PD / 琥珀酰化 / 基因定点突变