虎杖苷调控Nox4/NF-κB/TGF-β1/Smad通路对高糖引起的人肾系膜细胞损伤的保护作用

摘要

目的 探究虎杖苷(PD)对高糖引起的人肾系膜细胞(HGMC)损伤的保护作用及其机制。方法 以HGMC为目的细胞，利用CCK-8法筛查PD实验浓度。实验分组为NG组[正常糖组(5.5 mmol/L葡萄糖)]、NG+Mnt组[渗透压调节组(5.5 mmol/L葡萄糖+24.5 mmol/L甘露醇)]、HG组[高糖组(30 mmol/L葡萄糖)]、HG+低剂量PD组(5μg/ml)、HG+中剂量PD组(10μg/ml)、HG+高剂量PD组(20μg/ml)。各组培养24 h后，CCK-8检测各组细胞的活力。DCFH-DA检测细胞内活性氧(ROS)含量。利用WST-8法、比色法和ABTS法分别检测细胞内超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)和总抗氧化能力(T-AOC)。ELISA法检测细胞内肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、转化生长因子-β(TGF-β1)、纤维连接蛋白(FN)和Ⅳ胶原蛋白(CollagenⅣ)含量。Western blot法检测各组细胞内、TGF-β1、p-Smad 3、CollagenⅣ、NADPH氧化酶4(Nox4)和NF-κB P65蛋白表达水平。结果 随着PD浓度的增高，对HGMC细胞的增殖有抑制作用，浓度为40μg/ml,明显抑制HGMC细胞的增殖(P<0.05)。NG组与NG+Mnt组相比，细胞增殖率无变化(P>0.05)。与HG组相比，低、中、高PD剂量组均能明显抑制高糖诱导的HGMC细胞的增殖(P<0.05),与低剂量PD组相比，高低剂量PD组明显抑制高糖诱导的HGMC细胞的增殖(P<0.05)。与正常糖组相比，HG组的ROS、MDA水平，ELISA指标TNF-α、TGF-β1、CollagenⅣ、FN蛋白含量，Wb指标TGF-β1、p-smad3、CollagenⅣ、Nox4、NF-κB P65蛋白表达水平均明显增高(P<0.05),SOD和T-AOC水平明显下降(P<0.05)。与HG组相比，所有用药组的ROS、MDA水平，ELISA指标TNF-α、TGF-β1、collgen4、FN蛋白含量，Wb指标TGF-β1、P-smad3、CollagenⅣ、Nox4、NF-κb P65蛋白表达水平均明显降低(P<0.05),SOD和T-AOC水平明显升高(P<0.05)。与低剂量PD组相比，中、高剂量PD组的ROS、水平均明显降低(P<0.05),T-AOC水平均明显升高(P<0.05),TNF-α、CollagenⅣ蛋白水平均明显降低(P<0.05),高剂量PD组，P-Smad3、CollagenⅣ、Nox4蛋白表达水平均明显降低(P<0.05)。与中剂量PD组相比，高剂量PD组的TNF-α、CollagenⅣ、FN、P-smad3、Nox4蛋白水平均降低(P<0.05)。结论 PD通过下调Nox4/NF-κb/TGF-β1/Smad通路减轻高糖诱导的人肾系膜细胞的氧化应激、炎症和纤维化损伤。

关键词

虎杖苷 / 人肾系膜细胞 / Nox4 / NF-κB P65