联合抑制BRD4和Notch1对胶质瘤起始细胞侵袭迁移能力的影响研究

摘要

目的 观察应用JQ1和DAPT联合抑制BRD4和Notch1通路对人胶质瘤起始细胞侵袭迁移能力的影响。方法 将U87细胞置于无血清DMEM/F12干细胞培养基中培养，使用免疫磁珠法分选获得GICs,免疫荧光检测CD133及nestin鉴定GICs; JQ1为BRD4特异性抑制剂，DAPT为Notch1通路特异性抑制剂，设不同干预组：对照组、JQ1处理组、DAPT处理组、JQ1和DAPT共同处理组。运用RT-PCR及Western blot的手段检测各通路组的抑制情况；运用Transwell侵袭和迁移实验观察各组细胞侵袭能力的强弱。结果 免疫荧光结果显示，在细胞球中nestin和CD133呈阳性表达，可鉴定为GICs。与对照组和DAPT处理组相比，JQ1处理组及JQ1和DAPT共同处理组BRD4的mRNA及蛋白表达明显降低(P<0.01);与对照组相比，JQ1处理组、DAPT处理组及JQ1和DAPT共同处理组HES1的mRNA及蛋白表达明显降低(P<0.05),其中与JQ1处理组、DAPT处理组相比，JQ1和DAPT共同处理组HES1的mRNA及蛋白表达明显降低(P<0.01);Transwell显示：和对照组相比，JQ1处理组、DAPT处理组及JQ1和DAPT共同处理组的侵袭迁移能力降低，通过小室聚碳酸酯膜的细胞数目明显减少，其中JQ1和DAPT共同处理组通过小室聚碳酸酯膜的细胞数目显著少于JQ1处理组、DAPT处理组，差异均具有统计学意义(P<0.01)。结论 通过联合抑制BRD4和Notch1,能够显著降低胶质瘤起始细胞侵袭迁移能力。

关键词

胶质瘤 / BRD4 / Notch1 / 侵袭 / 迁移