益景汤下调VEGF-A及uPA拮抗高糖诱导的iBRB模型损害

摘要

目的 观察益景汤拮抗高糖诱导的体外血-视网膜内屏障(iBRB)模型损害及机制。方法 分离、培养大鼠视网膜微血管内皮细胞(ECs)和周细胞(RMPs)构建体外iBRB模型，分为低糖组(LG)、高糖组(HG)、米诺环素组(MG)和益景汤组(YG)四个组，其中LG用25 mmol/L葡萄糖孵育，HG用60 mmol/L葡萄糖孵育，MG在HG基础上加用10μg/ml米诺环素孵育，YG在HG基础上加用10%益景汤含药血清孵育，孵育12 h后进行观察。采用CCK-8法观察各组ECs的增殖，流式细胞仪法观察各组ECs的凋亡，荧光素钠法检测各组的渗透性，Western blot法检测各组occludin、claudin-5、ZO-1、VEGF-A、uPA蛋白的表达。结果 与LG相比较，高糖能够抑制ECs的增殖、诱导ECs的凋亡，增加iBRB模型渗透性，HG、MG、YG与LG差异具有统计学意义(均P<0.05)。益景汤能够干预高糖抑制ECs增殖，缓解高糖诱导的ECs凋亡，降低iBRB模型渗透性，YG与HG差异具有统计学意义(均P<0.05)。与LG相比，HG的occludin、claudin-5、ZO-1表达量降低，VEGF-A、uPA表达量增强，差异具有统计学意义(均P<0.05)。益景汤拮抗高糖所引起的occludin、claudin-5、ZO-1表达量下降，VEGF-A、uPA表达量增强，YG与HG相比差异具有统计学意义(均P<0.05)。结论 益景汤可以通过下调VEGF-A、uPA蛋白表达以抑制iBRB结构细胞的损害及occludin、claudin-5、ZO-1表达的下降，减轻iBRB渗漏，对DR微血管损害具有防治作用。

关键词

益景汤 / 高糖 / iBRB / 紧密连接 / 尿激酶纤溶酶原激活物 / 血管内皮生长因子

基金资助

福建省自然科学基金项目(2023J01852、2022J01352); 国家自然科学基金项目(81774369)