PD-L1基因沉默对多柔比星诱导乳腺癌SK-BR3细胞自噬的影响

摘要

目的 探讨程序性死亡配体1(PD-L1)基因沉默对多柔比星(DOX)诱导乳腺癌SK-BR3细胞自噬的影响。方法 通过Western blot(WB)和实时荧光定量PCR检测技术证实SK-BR3细胞表达PD-L1,利用CRISPR-Cas9系统设计并合成靶向PD-L1基因的sgRNA,构建PD-L1-PX458重组质粒并转染至SK-BR3中，利用WB检测筛选出基因编辑效率最高的质粒。随后依次使用CCK-8、transwell小室法及WB明确PD-L1对SK-BR3一般生物学功能的影响，并检测自噬相关蛋白LC3-Ⅱ/Ⅰ的表达水平。结果 成功构建了能有效沉默SK-BR3中PD-L1基因的PD-L1-PX458重组质粒；PD-L1沉默显著抑制了SK-BR3的增殖活力(抑制率达36.7%),侵袭与迁移能力明显降低(P<0.05);DOX可诱导SK-BR3发生自噬，5μg/ml浓度作用下自噬程度最高，自噬水平与处理时间相关，以5μg/ml DOX处理SK-BR3,24 h时自噬水平最高；与SK-BR3野生株相比，DOX+PD-L1基因沉默组细胞中自噬水平明显增高(P<0.05)。结论 PD-L1参与了SK-BR3的增殖与侵袭迁移，沉默PD-L1抑制DOX诱导的自噬水平，为乳腺癌的治疗提供了新的思路。

关键词

PD-L1基因 / 乳腺癌 / 多柔比星 / 自噬