基于慢病毒感染技术敲低CTNNB1基因的H1299细胞系构建

摘要

为构建β-连环蛋白编码基因CTNNB1稳定敲低的肺癌H1299细胞模型，以深入探讨其在肺癌转移复发及耐药性中的作用机制。通过筛选功能性siRNA序列，构建pLKO.1-CTNNB1-shRNA-EGFP-puro重组表达载体，基因测序证实shRNA序列正确插入载体，经293T细胞包装获得慢病毒颗粒。采用慢病毒感染H1299细胞后，通过嘌呤霉素筛选获得阳性细胞群体，结合有限稀释法成功分离单克隆细胞系。流式细胞术检测显示单克隆细胞EGFP阳性率达99%。RT-qPCR及Western blot分析表明，CTNNB1在mRNA和蛋白表达水平分别下降至对照组的54%和60%。实验成功建立CTNNB1基因稳定敲降的H1299细胞模型，该模型为后续研究β-catenin信号通路在肺癌恶性进展中的调控机制提供了可靠的细胞平台。

关键词

H1299细胞 / 慢病毒 / CTNNB1基因 / 敲低细胞系