CD19-CAR慢病毒生产方法的比较分析与优化

摘要

为优化CD19-CAR慢病毒的生产方法，以获得更优的生产条件，采用慢病毒三质粒包装系统（pLVX,psPAX2,pMD2.G）,并利用转染试剂(lipo8000^TM,Lipofectamine^? 3000,PEIpro^?)进行慢病毒的包装，通过超速离心和超滤技术对慢病毒进行浓缩。并利用流式细胞仪测定慢病毒滴度。研究发现，使用Lipofectamine^? 3000转染试剂包装的慢病毒原液滴度最高；在pLVX、psPAX2与pMD2.G质量比为4∶3∶1,质粒总量为5μg,质粒总量（m/μg）与转染试剂体积比（V/μL）为1∶5时，慢病毒的滴度达到最高。此外，使用超滤方法浓缩的慢病毒滴度高于超速离心法。尽管使用Lipofectamine^? 3000包装慢病毒原液滴度最高，但考虑到扩大生产的成本，选择性价比更高的PEIpro^?更为适宜。因此，本研究得出的最佳慢病毒生产方法是：使用转染试剂PEIpro^?包装慢病毒，在pLVX、psPAX2与pMD2质量比为4∶3∶1,质粒总量为5μg,质粒总量（m/μg）与转染试剂体积比（V/μL）为1∶5,收集48 h和72 h的病毒上清液，并通过超滤方法对慢病毒进行浓缩。

关键词

慢病毒 / 病毒包装 / 病毒浓缩 / 滴度